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    哪些樣品能用超微量測?一文助你判斷樣品是否兼容

    Nanophotometer?可以測量的樣品種類,是用戶關心的問題。特別是經常測量的核酸類樣品,我們一般用dsDNA的濃度作為示例,以展示設備的濃度測量范圍,而您可能會問,RNA可以測量嗎?引物可以測量嗎?短序列能測嗎?DNA納米材料能測嗎?

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    超微量分管光度計并不直接測量濃度,而是通過光學檢測器測量樣品的吸光值,根據朗伯-比爾定律計算濃度的。因此,符合該定律的所有樣品均可以被測量。以NP80機型為例,檢測器的檢測范圍為0.02A-330A(已換算為10mm下吸光值),波長范圍為200-900nm,那么原則上樣品的吸光值和吸收波長只要落在這個范圍內,都可以被測量,可獲得定量或相對定量的濃度值和其他信息。

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    核酸中的嘌呤和嘧啶堿基有共軛雙鍵,具有吸收紫外光的性質,其至大吸收波長在250nm-270nm之間。堿基與戊糖、磷酸形成核苷酸后,其至大吸收峰不會改變,至大吸收波長約在260nm,吸收低峰在230nm。目前通行的標準,在波長260nm處,1單位OD值的光密度相當于雙鏈DNA(dsDNA)濃度為50ng/μl、單鏈DNA(ssDNA)濃度為37ng/μl、RNA濃度為40ng/μl、單鏈寡核苷酸為33ng/μl(常規值)。

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    也就是說,設備測量的吸光值,乘以這些系數(1/ε),就可以得到對應樣品的濃度值。任何種類的核酸樣品都是可以測量的,關鍵是在軟件中正確選擇樣品種類。Nanophotometer?測量界面可選擇多種核酸樣品類型,在報告中也會有對應的方法學及消光系數顯示。也可以輸入核苷酸的序列來確定樣品具體的消光系數(可支持70萬個以上堿基序列,但通常用于寡核苷酸具體消光系數的確認)。


    如果錯誤地選擇了樣品類型,但已完成了測量,也有兩種方法可以補救:

    方法一:不抬起樣品蓋,重新選擇正確的樣品類型,再次測量。Implen的樣品壓縮法支持這種操作,而液柱拉伸法不建議一滴樣品的多次測量。

    方法二:在結果中查看吸光值數據,手動乘以消光系數,計算濃度。

    例如:測量RNA樣品時,選擇了dsDNA樣品,測得濃度為200ng/μl,則樣品實際濃度應為160ng/μl(200/50×40ng/μl)(暫不考慮很小的背景校正)。


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    對于蛋白質應用,原理相同,根據0.02-330A的吸光值檢測范圍,結合蛋白質的消光系數ε,可確定任意蛋白質樣品的濃度檢測范圍。如BSA(消光系數0.667)檢測范圍為0.03-478mg/ml,則某消光系數為1.33的單抗樣品檢測范圍即為0.015-239mg/ml。實際的線性范圍需要根據樣品情況具體測試。 

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    Nanophotmeter?基于紫外-可見吸收光譜的測量,不但可以勝任各種核酸和蛋白質的定量,還具備全光譜測量的優異性能,Implen在分析化學領域也具有廣泛的應用。樣品壓縮法的一大特點就是良好的樣品兼容性,推出的4096陣列CMOS檢測器也使測量的可靠性進一步提高。對于多樣化的樣本測量,Implen可以充分滿足用戶的期望。


    轉載:江西立康公眾號 鏈接:https://mp.weixin.qq.com/s/rFeCiftwwKivc3_HSeq9ig

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