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    重要的小知識:空白測量應該多久做一次?

    超微量分光光度計是核酸和蛋白定量的常用工具,在日常使用過程中,空白測量是在樣品測量前所必須的步驟。正確的理解什么是NanoPhotometer?或任何其他超微量分光光度計上的空白測量,以及空白讀數對工作流程和結果產生的影響,是保障儀器正確操作和獲得可靠結果的基礎。

    對于雙光束紫外-可見分光光度計而言,空白與樣品測量在空間上分開,扣除空白后得到樣品的吸光值。而超微量分光光度計通常采用單光束設計,空白與樣品測量需要在時間上分開,在進行空白測量后,得到表征光源強度的基線,然后樣品的測量值扣除空白測量值得到樣品的吸光值。在實際測量過程中,在一次空白測量之后,只要樣品的溶劑成分不變,可以連續地測量多個樣品,結果的計算都基于初始空白值的扣除。然而,空白基線的穩定是否受時間影響呢?即多久做一次空白,可以確定樣品的吸光值和濃度準確可靠呢?

    由于超微量分光光度計通常使用氙閃燈光源,作為一種閃爍點亮的冷光源,其穩定性是非常好的,基線的穩定性通常在1小時內可保持在0.002-0.003A(10mm光程)之內的波動水平,如果將光程因子計算在內,相當于1-2ng/μl dsDNA的濃度水平。對于常規濃度的樣品而言,這個誤差的引入幾乎可以忽略,也不會反映在重復性之上。因此,對于一般性實驗,在起碼一小時內,空白測量是不用重新進行的(在樣品臺清潔的情況下)。而對于低濃度樣品和一些流程嚴格控制的實驗而言,基線隨時間的波動將引入值得關注的測量不確定度,可能產生可觀的示值誤差,但對重復性的影響較小。因此,對于一些特殊樣品,空白測量與樣品測量不宜間隔較長的時間,以減小風險,甚至可能每個樣品都重新做空白。

    NanoPhotometer?在每次開機時都會對光源強度進行檢測,初始化通過即代表光源已進入工作狀態。在使用過程中,也可以通過光譜診斷功能,實時地進行光源性能檢查。空白測量和基線穩定性對于超微量而言是重要的,不少日常使用中出現的問題都源自于空白和基線漂移。除了設備自身的診斷功能之外,定期的進行設備的基線穩定性檢查也有助于判斷和基線有關的部件是否正常,如光源、光學路徑和檢測器。

    Implen通過樣品壓縮法實現了測量時間的大幅縮短,使光源的壽命延長至10年以上,在這個基礎上,進一步增強了光線的強度控制和穩定性。而出色的光學路徑設計和高性能通光材料的使用,也確定了基線波動在很小的范圍內。在實際使用過程中,用戶根據樣品的實際情況和實驗允差要求,制定合理的空白測量頻率,可在確定可靠性的同時提高實驗效率。



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